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造血祖細(xì)胞的集落培養(yǎng)
發(fā)布時(shí)間： 2012-12-14 點(diǎn)擊次數(shù)： 2041次以往CFU-GM培養(yǎng)的刺激物多用人白細(xì)胞、胎肌以及胎盤裂解液作為條件培養(yǎng)基等,現(xiàn)多用造血生長因子替代.這些細(xì)胞因子包括GM-CSF、G-CSF、M-CSF以及IL-3等,但常用GM-CSF.培養(yǎng)基多用IMDM,RPMI等,培養(yǎng)基常用瓊脂以及甲基纖維素,但效果前者較好.
培養(yǎng)體系包括20%-30%胎牛血清,50ng/mlGM-CSF,細(xì)胞懸液中細(xì)胞總數(shù)一般以（1-2）X10^5/ml為宜,其余用IMDM或RPMI補(bǔ)齊,但保持瓊脂終濃度為0.3%,甲基纖維素終濃度為0.9%-1.0%.細(xì)胞一般置于直徑為33mm的培養(yǎng)皿或6孔板中,于37℃、5%CO2飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng).
（1）集落計(jì)數(shù) 一般培養(yǎng)10-14天觀察集落,大于40個細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)為一個集落.
（2）集落形態(tài) 一般CFU-GM的形態(tài)分3種.
致密型 細(xì)胞緊密成團(tuán),細(xì)胞個體較小,對為粒細(xì)胞為主的集落.
混合型 細(xì)胞團(tuán)中央為緊密成團(tuán)的粒細(xì)胞,周圍彌散分布著單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞.
松散型 細(xì)胞團(tuán)比較均勻地分散,細(xì)胞個體較大,多為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組成.